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第九节 烧伤湿性医疗技术MEBO的抗菌作用实验研究
作者：中国中西医结合学会烧伤专业委员会 出版社：中国医药科技出版社 发行日期：2000年6月 【摘要】 观察湿润烧份膏 (MEBO)对有芽孢厌氧菌（破伤风杆菌)、无芽孢厌氧菌（脆弱类杆菌、痤疮丙酸杆菌)和真菌(白色念珠菌) 等的抗菌作用。将上述细菌分别接种在含 MEBO的琼脂培养基上传代培养，观察MEBO 对细菌的作用。实验结果 MEBO 使细菌的形态结构培养特性等方面发生变异，并明显地影响细菌的生长繁殖速度和侵袋力。结果表明 MBBO 具有较强的广谱抗菌作用。
【关键词】 MEBO 抗菌作用 厌氧菌 真菌 细菌变异
大量烧伤创伤病人采用湿润暴露疗法用 MEBO 治疗的临床资料表明，MEBO 具有较强的控制烧伤创面感染的能力，其作用机制是多方面的。本实验观察了 MEBO 使厌氧菌芽孢杆菌一破伤风杆菌、无芽孢厌氧菌-脆弱类杆菌和痤疮丙酸杆菌、真菌一白色念珠菌等在形态结构、菌落特点和致病性等方面发生变异。实验研究结果表明，烧伤湿润暴露疗法的MEBO具有较强的广谱抗菌作用，又能给子被烧伤破坏了的机体局部皮肤组织残存细胞以维持正常生命的环境和促进分裂再生的条件,是一种具有双向调节作用的药物。
材料和方法
1.材料 MEBO：北京光明中医烧伤创疡研究所研制。B224 型厌氧培养缸：滨州医学院附属医院检验科任全君研制。厌氧培养基：上海生物制品研究所。菌种：脆弱类杆菌、痤疮丙酸杆菌，购自上海医科大学。破伤风杆菌、白色念珠菌，由滨州医学院附属医院院检验科提供。以上细菌经厌氧琼脂培养基传代后备用。
2.方法及分组
（1）(MEBO 试验组：将四种细菌(脆弱类杆菌、痤疮丙酸杆菌、破伤风杆菌和白色念珠菌)分别接种在含有一定浓度 MEBO 的培养基上。厌氧菌置于厌氧培养缸 37°C培养48~72h为代。白色念珠菌置于恒温箱37C培养48~721为一代。连续传代4~6代，每代进行革蓝染色(Gram's),观察细菌的染色反应及形态大小、菌落特点等。
(2)正常对照组：以上四种细菌在接种到含 MEBO 的培养基前（原代菌）进行 Gram's, 观察细菌形态、大小及菌落特点等。
检测指标
1.细菌变异现象的观察
(①)观察破伤杆菌、脆弱类杆菌和痤论丙酸杆菌：将上述三种细菌分别接种在含有一定浓度MEBO 的培养基上，进行传代培养后观察每代细菌的形态、菌落等的变异现象。
(2观祭白色念珠菌在含 MEBO 培养基上的变异现象。
2.芽管试验
将原代菌及在 MEBO 培养基上传代的1~2代、5~6代白色念珠菌分别接种在0.5ml人血清液体培养基中，置于37°C水浴箱水浴 3h，取菌涂片、染色、计数500个白色念珠菌，求其芽管产生百分率。
3.MEBO 对细菌生长速度的影响 将在含有 MEBO 的培养基上传代的第 10代金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和原代金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌用无菌取菌环分别取相同的菌落，研磨于0.1ml 盐水中，再加盐水至 1ml.分别取菌置于血球计数盘上计数细菌数 /ml迓行比较。
4. MEBQ 对绿脓杆菌侵袭力的影响 取在MEBO 培养基传代培养的第 10代绿脓杆菌和在普通培养基上培养的原代绿脓杆菌，分别取菌落于盐水中计数、稀释，使其含细菌数为3 ×109/m1。然后再取菌液分别给小鼠皮内注射0.Iml，201后处死。于注射细菌部位，由皮肤到肌冉皮肤到肌层，取一长方形组织块，进行固定包埋，组织切片，HE染色等。观察病理变化。
2.MEBO对白色念珠菌的作用 见表5-9-2。
讨 论
细菌生长繁殖迅速，世代周期短（一般20min 为一代)。因此，有些细菌在繁殖过程中易受环境中不利因素的影响而发生细菌性状的变异。如细菌形态结构的变异、培养特性、毒力、抗原性和耐药性等方面的变异。细菌形态的变异与细菌的分裂有关。细菌分裂过程是一复杂的过程，它对环境中非致死性不利因素作用的敏感性比蛋白质或DNA 合成对有害物质的敏感性更大。因此，细菌细胞可出现多形态—多核丝状或圆球状等变异，如破伤风杆菌、脆弱类杆菌。这是由于细胞壁合成妥影响不能及时形成或断裂，而代谢仍在进行有关。细菌性状变异的发生与作用于细菌的不利因素的强度、作用的时间有密切关系。从本实验中清楚地观察到，同一种细菌和在含不同浓度MEBO 的培养基上出现形态变异的时间及形态变异的特点是有差异的。
本实验观察了 MEBO 对破伤风杆菌、脆弱类杆菌、痤疮丙酸杆菌和白色念珠菌等的抗菌作用。这些细菌都是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可致病，大多数属于内源性感染。烧伤病人由于大量应用抗生素，易造成菌群失调，导致条件致病菌白色念珠菌的感染，时有报道。烧伤创面的细菌感染，需氧菌（如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌等）仍是优势菌。由于烧伤创面可发生缺血坏死，也易被漏检。王德旺 等（1983年)报告 34例烧伤创面厌氧芽孢杆菌培养阳性率为 23.9%，且均为多菌性混合感染。
破伤风杆菌属于厌氧芬孢杆菌，在含 MEBO 的培养基中传代后，出现长丝状变异，在第3三代有较多的菌体形成芽孢。我们知道细菌是以二分裂法进行繁殖，具有繁殖能力的菌体称为繁殖体。一个细菌只形成一个芽孢，一个芽孢在适宜条件下也只生成一个菌体（繁殖体），细菌数量并不增多，所以细菌芽孢的形成并非细菌繁殖方式，而是细菌对营养缺乏等不利因素环境的一种反应，此时细菌的生命活动处于休眠状态，代谢缓慢，但芽孢保持了细菌的生命活动。芽孢在不适宜因素存在的环境中是不能形成繁殖体而进行繁殖的。破伤风杆菌属于厌氧菌，只有在一定条件下细菌才能进行繁殖，产生外毒而致病。同样，白色念珠菌以出芽方式进行繁殖，在含 MEBO 的培养基上传代至第6代，见到芽生孢子较正常念珠菌的芽生孢子要少得多，芽管产生率由正常的90%降至 0.5%~2%。由此可见，MEBO对破伤风杆菌、白色念珠菌的生长繁殖、致病性等产生的影响。
从表5-9-3可见到要含 MEBO 培养基上传代至第10代的绿脓杆菌，经20h培养，菌落的细菌数/ml 与原代细菌相比减少约29/30倍，对小鼠机体组织的侵袭力显著降低。结果说明细茵处于不利因素的条件下，不仅使细菌的形态结构发生交异，而且它的生理特性也随之发生了变化。
实验硏究曾观察了MEBO 对烧伤感染常见的G+需氧菌金黄色葡萄球菌、G 菌大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等的抗菌作用，和本实验对G有芽孢厌氧菌（破伤风杆菌）、G无芽孢厌氧菌（痤疮丙酸、脆弱类杆菌）及真菌(白色念珠菌）等的抗菌作用。实验研究结果和临床研究资料表明，MEBO 是一种具有较强的广谱抗菌作用和促进烧伤创面愈合的双向调节作用的药物。